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共聚焦显微镜
TCS SP8 DLS共聚焦显微镜

TCS SP8 DLS共聚焦显微镜

发布时间:2020-01-06 浏览次数: 将两种专用成像系统的优势合二为一:使用 Leica TCS SP8 DLS (数字光片),您可在显微镜上使用柔和的单平面照明实现完全的共聚焦。通过研制出 TwinFlect 反光镜,我们就能将共聚焦平台 Leica TCS SP8 变为简单易用的多功能光片显微镜。

徕卡TCS SP8 DLS 结合光片与共聚焦技术 Leica TCS SP8 DLS


将两种专用成像系统的优势合二为一:使用 Leica TCS SP8 DLS (数字光片),您可在显微镜上使用柔和的单平面照明实现完全的共聚焦。通过研制出 TwinFlect 反光镜,我们就能将共聚焦平台 Leica TCS SP8 变为简单易用的多功能光片显微镜。

我们转向采用光片垂直布置设计。

 

黑腹果蝇眼睛绿色荧光蛋白表征 (3P3 催化剂) 的颜色编码三维图集。样品来源:Nadja Dinges,Roignant Lab,IMB Mainz。

 


扩展选件


 ● 通过单平面照明增强细胞活性

 ● 使用 sCMOS 摄像头观察快速实时过程

 ● 样品处理简单,可进行多位置实验

 ● 将共聚焦模式与光片显微镜技术相结合,拓展新应用领域

 ● 两侧同时照明,消除昏暗区域

 ● Leica TCS SP8 全系列始终能针对您的应用找到理想成像方法

 ● 将共聚焦平台变为光片显微镜。随时从 Leica TCS SP8 升级为 Leica TCS SP8 DLS

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光片垂直布置—如何将光片技术引入共聚焦平台?

光片显微镜通常需要在独立系统中安装专用的光学装置,其中照明和检测物镜相互垂直布置。Leica TCS SP8 DLS 让光片显微镜变得非常的简便。独特的 TwinFlect 反光镜装置使照邵武片偏转 90 度,从而将照明和检测光路集成到每台倒置 Leica TCS SP8 的纵向轴中,同时又不牺牲共聚焦功能。

 


执行和记录长期观察

成像需要光照,但光照过强会损伤细胞。光片显微镜是当今柔和的成像方案,它可减少光毒性和光漂白造成的总体光损伤。这会自动降低样品活性。在发育生物学中,柔和光片成像尤其有帮助:其光照强度低,摄取快速,以便长期观察果蝇胚胎等敏感性发育生物体,并以实时三维方式了解组织和器官的形成过程。


Low phototoxicity and specimen imaging in 3D: Development of Drosophila melanogaster over six hours. Probe: Light-sensitive RFP. 3D rendering. 150 µm z stack, 30sec/stack.

 


光片成像原理

光片显微镜对样品进行单平面照明,非常适合敏感样品和快速生物过程的成像。由于不存在离焦激发,可将光毒性的影响局限于焦平面上。这表示您还可自动获得光学切片,并在光片下移动样品,从而实现样品 3D 成像。


 



多色长期观察


斑马鱼体侧线 17 小时发育过程。样品来源:Darren Gilmour,EMBL Heidelberg (斑马鱼 36hpf,CldnB:lynGFP/CXCR4B:nucTomato)

高速成像:斑马鱼跳动的心脏,转基因株系 flik1::EGFP。在 xytz 录制之后进行后期摄取对齐。录制速度:120 帧/秒。来源:Emily Steed,Vermot Lab,IGBMC Strasbourg,France。

 


以极佳的分辨率快速摄取图像


您是否需要以三维方式长期观察快速周期性生物过程?DLS 模块就是您的不二选择。发现斑马鱼心脏的律动之美。 

使用 Leica TCS SP8 DLS,您可在两个尖端的 sCMOS 摄像头之间任意选择,以出色的分辨率和高达 120 帧/秒的帧频进行快速图像摄取:pco.edge sCMOS 摄像头和 Hamamatsu 推出的 ORCA-flash 4.0 V2 摄像头均已完全集成在 LAS X LightSheet Wizard 中。



追踪快速的周期性运动

LAS X软件里新的 xytz 扫描模式可实现平面时间序列成像,并制成4D电影格式播放。该功能使得研究者可以追踪那些无法在传统Z轴堆积延时摄影模式下捕捉到的快速运动-比如斑马鱼心脏的跳动。


 


众多其他应用优势

我们的光片模块不仅仅作为共聚焦显微镜的功能性插件。Leica TCS SP8 和数字光片相辅相成,使您可随意扩展选件。您可在 LAS X 软件中方便地切换共聚焦和光片模式,使用共聚焦技术轻松操控样品。光转换或致伤实验乃至后续的柔和长期观察将变得十分简便。

组合成像模式:在 Kaede 斑马鱼尾巴上的光转换 (405 nm 激光) 和致伤 (多光子激光) 实验。移向伤口 (大片红色区域) 的光转换细胞 (小红点) 的延时录制。


被巨噬细胞愈合的伤口

4 日龄斑马鱼胚胎受伤后尾沧州的巨噬细胞 (mpeg1:Kaede)。样品来源:Francesca Peri,EMBL Heidelberg。

 

始终选用正确的激光

Leica TCS SP8 共聚焦显微镜的所有可见激光都可用于光片成像。白光激光在光片实验中提供较大的灵活性,以便选择正确的染料。在多色实验中,甚至可使用光谱相近的荧光基团。

 


熟悉的样品制备流程

Leica TCS SP8 DLS 采用垂直实验配置,样品制备流程与您原先熟悉的流程相近。样品封装在传统的玻璃底 Petri 培养皿中,可直接操作。您甚至还可在多个实验位置筛选多个样品:利用共聚焦载物台自动化技术在同一实验配置下实现多样品成像。唯一的前提条件是:在样品两侧需要留出放置 TwinFlect 反光镜的空间。

 

Leica TCS SP8 DLS 的样品制备。样品包裹在玻璃底 Petri 培养皿的琼脂中。必须将多余的琼脂清除干净,以便为 TwinFlect 反光镜留出空间。

 


面向工作流的软件设计

LAS X 显微镜软件可逐步指导用户完成数据记录和评估。面向工作流的设计可帮助用户高效使用仪器。校准程序十分便捷,可精确创建光片。 

样品两侧照明设计:两块 TwinFlect 反光镜相对放置,使它们均可被扫描器瞄准,从而消除昏暗区域。要在较大视场下获得清晰图像,可通过 LAS X 软件的 LightSheet Wizard 在线或离线融合选件将两幅图像融合在一起。 

LAS X 软件还有许多附加软件包,您可根据自己的需求进行定制。LAS X 三维可视化模块可实现直观剪辑、快速渲染和立体显示,以新颖的方式交互处理三维数据。“拼贴图”实验可帮助您观察大片区域,而“标记和查找”实验可在多位置设置下观察多个相关区域。

 


 

优质的光学器件

适合各类应用的优质物镜是徕卡公司最显著的标志之一。垂直布置光片系统的核心由物镜和 TwinFlect 反光镜装置构成。您可根据您的实验要求在两种照明物镜间任意选择 - Leica HC PL Fluotar 2.5x/0.07 和 Leica HCX PL FLUOTAR 5x/0.15,以此创建所需的光片。要展现最微小的细节或获取更大的视场,您可选择我们的检测物镜:Leica HC FLUOTAR L 25x/0.95 W 或 Leica HC APO L 10x/0.3 W 水浸物镜。

 


便捷的数据处理

长期 3D 观察过程会产生大量数据。LAS X 软件中集成了多种工具,可方便地管理这些数据。使用在线融合工具,您可选择保留原始数据,或仅保留融合图像以节省磁盘空间。摄取时将自动保存数据,而借助智能加载功能可方便地查看数据,直接访问大延时数据集中的特定时间点或相关 Z 轴堆栈。您可在管线中编译所需的后期处理步骤,它们将自动处理。

 



软件控制的气候室

软件控制的气候室可保持最适宜样品的环境条件。用户可使用 LAS X 环境控制模块实现对实验条件的全面控制。在实验过程中,可监控所记录的环境数据。您可在同一个界面设置所有环境条件,并运行温度曲线,例如,热冲击实验的温度曲线。



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